技術(shù)文獻(xiàn)
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做ELISA實(shí)驗(yàn)收集血漿樣本時(shí)為什么要加抗凝劑?顧名思義,抗凝劑就是為了防止血液凝固的。加了抗凝劑后,血液在一定的時(shí)間內(nèi)會(huì)保持原來(lái)的物理化學(xué)狀態(tài)。如果沒(méi)加抗凝劑,血漿是凝聚在一起的,不好測(cè)定。常見(jiàn)的抗凝劑有哪些呢?今天就為您詳細(xì)總結(jié)如下:
?常見(jiàn)的血漿抗凝劑主要包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉和草酸鹽等,它們各有特點(diǎn),適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。
?肝素是最常用的抗凝劑之一,通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,抑制凝血酶的活性,從而阻止纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。肝素抗凝的血漿適用于大多數(shù)生化檢測(cè)和部分免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),但高濃度的肝素可能干擾PCR和某些ELISA實(shí)驗(yàn),需謹(jǐn)慎使用。
EDTA(乙二胺四乙酸)通過(guò)螯合鈣離子阻斷凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng),能有效防止血液凝固。EDTA抗凝的血漿適用于血液學(xué)檢測(cè),如血細(xì)胞計(jì)數(shù),但由于其可能影響某些金屬離子依賴性酶活性,一般不推薦用于鈣、鎂等離子的測(cè)定。
檸檬酸鈉通過(guò)與鈣離子結(jié)合發(fā)揮抗凝作用,常用于凝血功能檢測(cè)(如PT、APTT)。其抗凝效果穩(wěn)定,且對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)干擾較小,因此是許多免疫學(xué)研究的首選抗凝劑。
草酸鹽(如草酸鉀、草酸鈉)也能通過(guò)結(jié)合鈣離子抗凝,但可能改變血漿pH值或干擾某些代謝物測(cè)定,因此應(yīng)用范圍較窄。
選擇抗凝劑時(shí),需結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)指標(biāo),避免因抗凝劑干擾導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。例如,ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子時(shí),肝素或檸檬酸鈉抗凝血漿更為合適,而EDTA可能影響某些抗原-抗體結(jié)合。此外,抗凝劑與血液的比例也需嚴(yán)格把控,以確保樣本質(zhì)量。
總之,合適的抗凝劑不僅能保證血漿樣本的穩(wěn)定性,還能提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。
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?常見(jiàn)的血漿抗凝劑主要包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉和草酸鹽等,它們各有特點(diǎn),適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。
?肝素是最常用的抗凝劑之一,通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,抑制凝血酶的活性,從而阻止纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。肝素抗凝的血漿適用于大多數(shù)生化檢測(cè)和部分免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),但高濃度的肝素可能干擾PCR和某些ELISA實(shí)驗(yàn),需謹(jǐn)慎使用。
EDTA(乙二胺四乙酸)通過(guò)螯合鈣離子阻斷凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng),能有效防止血液凝固。EDTA抗凝的血漿適用于血液學(xué)檢測(cè),如血細(xì)胞計(jì)數(shù),但由于其可能影響某些金屬離子依賴性酶活性,一般不推薦用于鈣、鎂等離子的測(cè)定。
檸檬酸鈉通過(guò)與鈣離子結(jié)合發(fā)揮抗凝作用,常用于凝血功能檢測(cè)(如PT、APTT)。其抗凝效果穩(wěn)定,且對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)干擾較小,因此是許多免疫學(xué)研究的首選抗凝劑。
草酸鹽(如草酸鉀、草酸鈉)也能通過(guò)結(jié)合鈣離子抗凝,但可能改變血漿pH值或干擾某些代謝物測(cè)定,因此應(yīng)用范圍較窄。
選擇抗凝劑時(shí),需結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)指標(biāo),避免因抗凝劑干擾導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。例如,ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子時(shí),肝素或檸檬酸鈉抗凝血漿更為合適,而EDTA可能影響某些抗原-抗體結(jié)合。此外,抗凝劑與血液的比例也需嚴(yán)格把控,以確保樣本質(zhì)量。
總之,合適的抗凝劑不僅能保證血漿樣本的穩(wěn)定性,還能提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。
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