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技術(shù)文獻(xiàn)

10種病原體PCR檢測(cè)試劑盒使用方法

文字:[大][中][小] 2023-4-24    瀏覽次數(shù):578    
10種病原體PCR檢測(cè)試劑盒使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀(guān)察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱(chēng)為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
 嗜水氣單胞菌
 肺炎鏈球菌
 產(chǎn)氣腸桿菌
 肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種
 奇異變形桿菌
 化膿性鏈球菌
 陰溝腸桿菌陰溝亞種
 嗜熱脂肪地芽孢桿菌
 嗜熱鏈球菌
 費(fèi)氏志賀氏菌(福氏志賀氏菌)
 Hyphomonas adhaerens
 脫硫弧菌脫硫亞種(脫硫微螺菌、脫硫螺菌、脫硫桿菌、脫硫芽孢弧菌、脫硫弧菌)
 厭氧消化鏈球菌
 銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)
 纖維纖維微菌
 長(zhǎng)野解普魯蘭桿菌
 變異鏈球菌
 人蒼白桿菌
 戊糖乳桿菌
 菊糖芽孢乳桿菌
 豇豆慢生根瘤菌
 長(zhǎng)雙歧桿菌
 鰒發(fā)光桿菌
 斯氏梭菌
 嗜鹽四聯(lián)球菌
 海蘇特氏菌
 耐久腸球菌(堅(jiān)韌鏈球菌)
 海氏腸球菌
 盲腸腸球菌
 伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌
 類(lèi)干酪乳桿菌類(lèi)干酪亞種
 嗜肺軍團(tuán)菌
 谷氨酸棒狀桿菌(黃色短桿菌)
 發(fā)酵纖維單胞菌
 長(zhǎng)赤細(xì)菌
 海洋鹽單胞菌
 Georgenia muralis
 河流弧菌


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