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技術(shù)文獻

本迪布焦型埃博拉病毒PCR檢測試劑盒反應五要素

文字:[大][中][小] 2022-10-25    瀏覽次數(shù):441    
本迪布焦型埃博拉病毒PCR檢測試劑盒反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒
小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA試劑盒
小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒
相撲結(jié)合酶UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)ELISA試劑盒
腺相關(guān)病毒(AAV)ELISA試劑盒
腺苷脫氨酶(ADA)ELISA試劑盒
腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)ELISA試劑盒
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2(ABCG2)ELISA試劑盒
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)ELISA試劑盒
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2(ABCG2)ELISA試劑盒
線粒體肽蛋氨酸亞砜還原酶(MSRA)ELISA試劑盒
銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒
酰基化饑餓素(AG)ELISA試劑盒
酰化刺激蛋白(ASP)ELISA試劑盒
纖維母細胞生長因子受體1癌基因伴侶(FGFR1OP)ELISA試劑盒



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