人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP注意事項

一，燒瓶培養(yǎng)的處理程序

在培養(yǎng)瓶中接種細胞并在培養(yǎng)基中完全填充培養(yǎng)基以防止運輸過程中細胞的丟失。

1、收到后，目視檢查培養(yǎng)物是否有微生物污染的宏觀證據(jù)。

使用倒置顯微鏡（配備有相位傳感器），仔細檢查是否有微生物污染的證據(jù)。還檢查以確定大多數(shù)細胞是否仍然附著在燒瓶底部？在運輸過程中，培養(yǎng)物有時被粗略地處理，并且許多細胞經(jīng)常分離并懸浮在培養(yǎng)基中（但仍然是可行的）。

2、如果細胞仍然附著，無菌去除5至10毫升的運輸介質(zhì)。可以節(jié)省運輸媒介以重復(fù)使用。在5%℃的空氣中，在37℃下培養(yǎng)細胞，直到它們準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng)。

3.如果細胞沒有附著，無菌地移除燒瓶的全部內(nèi)容物，并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質(zhì)并保存。在10毫升這種培養(yǎng)基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下，在37℃下孵育，直至細胞準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng)。

二、傳代程序

體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養(yǎng)容器所需的分離培養(yǎng)基的量。

1、去除和丟棄培養(yǎng)基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層，除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散（取決于胰蛋白酶的批）。

注意：為了避免結(jié)塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養(yǎng)基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5、在新培養(yǎng)容器中加入適當(dāng)?shù)募毎麘乙旱确衷嚇印?

6、培養(yǎng)37°C培養(yǎng)基。

推薦栽培比為1:3∶1:4。

介質(zhì)更新：每周2至3次

三、冷凍保存程序

該協(xié)議使用量在75平方厘米的瓶；比例減少或增加的其他尺寸的分離介質(zhì)的培養(yǎng)容器的數(shù)量。

1、去除和丟棄培養(yǎng)基。

2。簡要沖洗細胞層0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的（通常在1到10分鐘）。

注意：為了避免結(jié)塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養(yǎng)基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，將細胞懸液到離心管和旋轉(zhuǎn)約5 1000rpmfor 10分鐘。

6、低溫保存培養(yǎng)液中的上清液和復(fù)蘇細胞。

7、將細胞轉(zhuǎn)移至低溫瓶，1ml／瓶。

8、低溫容器中的細胞Frozen（NalgENα5100-01）。