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技術文獻

人膽囊上皮細胞永生化細胞細胞傳代步驟

文字:[大][中][小] 2020-5-27    瀏覽次數:478    

膽囊,是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構造,有濃縮和儲存膽汁之作用。膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。 膽囊內面以粘膜覆蓋,有發達的皺襞。膽囊收縮排空時,皺襞高大而分支;膽囊充盈時,皺襞減少變矮。粘膜上皮為單層柱狀,內分散分部著少量杯狀細胞。膽囊粘膜細胞具有典型的吸收型細胞的特征,具有較強的吸收和濃縮功能,上皮細胞吸收膽汁中的水和無機鹽,經細胞側面的質膜轉運至上皮細胞間隙內,吸收的水和無機鹽通過基膜進入固有層的血管和淋巴管內。同時,膽囊粘膜亦有分泌功能,分泌粘液。 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。


人膽囊上皮細胞永生化細胞細胞傳代步驟:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

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